Возможны оба варианта, но предпочтительно: не знает предмета. Общее правило: слова, зависящие от глагольной формы с отрицанием, могут стоять в форме как родительного, так и винительного падежа, если в зависимости от глагола без отрицания они употребляются в винительном падеже: знает предмет – не знает предмета / предмет. Но при глаголах восприятия мысли (в том числе знать) обычно употребляется родительный падеж.
Можно поставить запятую либо тире.
Корректно: не знал нотной грамоты.
Запятая не нужна, так как придаточная часть усечена до одного союзного слова что (сопровождаемого служебным словом — предлогом).
Пожалуйста, поясните контекст.
Корректно: Я не знал этого слова.
В заголовках используются все знаки препинания, необходимые по условиям синтаксической конструкции, кроме точки как знака конца предложения.
Проясните, пожалуйста, свой вопрос. Знаки препинания ставятся не "при слове", а в грамматической конструкции.